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人白介素17(IL-17)ELISA檢測試劑盒技術(shù)說明書
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  人白介素17(IL-17)ELISA檢測試劑盒技術(shù)說明書

  BS-9770人白介素17(IL-17)ELISA試劑盒

  一、產(chǎn)品概述

  本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA),專用于定量檢測人血清、血漿及相關(guān)生物液體樣本中白細(xì)胞介素17(IL-17)的含量。IL-17是一種由Th17細(xì)胞分泌的促炎細(xì)胞因子,在自身免疫疾病和炎癥反應(yīng)中起關(guān)鍵作用。

  二、檢測原理

  雙抗體夾心技術(shù):

  預(yù)包被抗人IL-17單抗的微孔板捕獲樣本中的IL-17。

  加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的二抗,形成“抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物。

  通過TMB顯色反應(yīng),顏色深淺與IL-17濃度呈正相關(guān),450nm波長下測定吸光度(OD值)。

  三、試劑盒組成

  組分規(guī)格(96孔配置)保存條件

  酶標(biāo)包被板1×96孔2–8℃

  標(biāo)準(zhǔn)品(270ng/L)0.5ml×1瓶2–8℃(長期-20℃)

  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶2–8℃

  酶標(biāo)試劑6ml×1瓶2–8℃

  樣品稀釋液6ml×1瓶2–8℃

  顯色劑A/B液各6ml×1瓶2–8℃避光

  終止液6ml×1瓶2–8℃

  濃縮洗滌液20ml×30倍×1瓶2–8℃

  說明書1份室溫

  四、樣本處理要求

  血清/血漿:

  室溫靜置10–20分鐘,2000–3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘,取上清液

  避免反復(fù)凍融,若出現(xiàn)沉淀需再次離心

  細(xì)胞培養(yǎng)上清:

  離心后取上清,檢測分泌性成分時需無菌操作

  尿液/組織勻漿:

  尿液離心后取上清;組織樣本需勻漿后離心分裝

  五、操作步驟

  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋:

  梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品(如270ng/L至1ng/L),每孔加樣50μL

  樣本加樣:

  樣本稀釋后加10μL至微孔,加樣量40μL(總稀釋度5倍)

  溫育:

  37℃避光反應(yīng)30分鐘,封板膜覆蓋

  洗滌:

  洗滌液浸泡1分鐘/次,重復(fù)3–5次,拍干孔內(nèi)液體。

  顯色與終止:

  加入TMB顯色液避光反應(yīng)15–20分鐘,終止液終止反應(yīng)。

  讀數(shù):

  酶標(biāo)儀450nm波長測定OD值,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度。

  六、性能指標(biāo)

  靈敏度:低至0.1pg/mL(小鼠IL-17參考值) ,人IL-17約3.8pg/mL。

  檢測范圍:7.8–500pg/mL(人IL-17C參考值) ,或31.3–2000pg/mL(人IL-17)。

  特異性:與IL-17家族其他成員(如IL-17B、IL-17F)無交叉反應(yīng)。

  重復(fù)性:板內(nèi)/板間變異系數(shù)<10%

  七、注意事項(xiàng)

  保存條件:

  試劑盒2–8℃保存,標(biāo)準(zhǔn)品長期存放需-20℃

  有效期:

  6個月(4℃),12個月(-20℃)。

  實(shí)驗(yàn)環(huán)境:

  避免強(qiáng)光照射,顯色液需37℃預(yù)平衡。

  八、參考文獻(xiàn)

  雙抗體夾心法原理及操作規(guī)范

  樣本處理與保存指南

  試劑盒性能驗(yàn)證數(shù)據(jù)

  注:以上僅供參考,不作為實(shí)際數(shù)據(jù),實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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