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小鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書(shū)
發(fā)布時(shí)間:2025/10/9瀏覽:20次
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  小鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書(shū)

  BS-2260小鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)ELISA試劑盒

  一、實(shí)驗(yàn)原理

  本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法,通過(guò)特異性抗體捕獲小鼠血清/血漿中的ALT,結(jié)合酶標(biāo)二抗顯色反應(yīng),通過(guò)吸光度值定量檢測(cè)ALT活性。檢測(cè)范圍4.687-300U/L,靈敏度達(dá)1.17U/L 。

  二、試劑組成

  預(yù)包被微孔板:ALT抗體包被(96孔/板)

  標(biāo)準(zhǔn)品:6瓶(0-100U/mL梯0度濃度)

  酶標(biāo)二抗:凈(6mL)

  底物液:TMB顯色液(A/B各6mL)

  終止液:2Mliusuan(6mL)

  濃縮洗滌液:20×Tween-20緩沖液(20mL)

  三、操作步驟

  1. 樣本準(zhǔn)備

  采集小鼠全血至無(wú)內(nèi)毒素試管,離心(3000rpm,10min)分離血清/血漿。

  避免溶血、脂血樣本,短期保存(2-8℃≤48h),長(zhǎng)期需-80℃凍存(避免反復(fù)凍融)。

  2. 檢測(cè)流程

  步驟操作溫度/時(shí)間

  1、標(biāo)準(zhǔn)品/樣本各100μL加至對(duì)應(yīng)孔室溫

  2、加入酶標(biāo)二抗50μL,封板避光孵育37℃, 60min

  3、洗滌液洗板3次(每次浸泡1min)-

  4、加入底物液A/B各50μL37℃避光, 15min

  5、加入終止液50μL,立即測(cè)450nm吸光度-

  四、注意事項(xiàng)

  試劑保存:未開(kāi)封試劑2-8℃避光保存(有效期6個(gè)月),開(kāi)封后R1/R2需28天內(nèi)用完。

  操作規(guī)范:

  移液器吸頭不可混用,避免交叉污染。

  洗滌需凈,避免殘留氣泡。

  安全防護(hù):處理樣本時(shí)需戴手套,廢棄物按生物危害物處理。

  五、結(jié)果計(jì)算

  繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)(濃度-OD值),擬合線(xiàn)性方程。

  樣本ALT活性(U/L)=(樣本OD值-空白OD值)/標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)斜率。

  六、常見(jiàn)問(wèn)題

  高背景值:可能因洗滌不凈或底物曝光時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。

  線(xiàn)性不佳:檢查標(biāo)準(zhǔn)品稀釋梯度或孵育溫度一致性。

  注意:以上僅供參考,不作為實(shí)際數(shù)據(jù),實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢(xún)技術(shù)老師。

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