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小鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書(shū)
BS-2260小鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)ELISA試劑盒
一、實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法,通過(guò)特異性抗體捕獲小鼠血清/血漿中的ALT,結(jié)合酶標(biāo)二抗顯色反應(yīng),通過(guò)吸光度值定量檢測(cè)ALT活性。檢測(cè)范圍4.687-300U/L,靈敏度達(dá)1.17U/L 。
二、試劑組成
預(yù)包被微孔板:ALT抗體包被(96孔/板)
標(biāo)準(zhǔn)品:6瓶(0-100U/mL梯0度濃度)
酶標(biāo)二抗:凈(6mL)
底物液:TMB顯色液(A/B各6mL)
終止液:2Mliusuan(6mL)
濃縮洗滌液:20×Tween-20緩沖液(20mL)
三、操作步驟
1. 樣本準(zhǔn)備
采集小鼠全血至無(wú)內(nèi)毒素試管,離心(3000rpm,10min)分離血清/血漿。
避免溶血、脂血樣本,短期保存(2-8℃≤48h),長(zhǎng)期需-80℃凍存(避免反復(fù)凍融)。
2. 檢測(cè)流程
步驟操作溫度/時(shí)間
1、標(biāo)準(zhǔn)品/樣本各100μL加至對(duì)應(yīng)孔室溫
2、加入酶標(biāo)二抗50μL,封板避光孵育37℃, 60min
3、洗滌液洗板3次(每次浸泡1min)-
4、加入底物液A/B各50μL37℃避光, 15min
5、加入終止液50μL,立即測(cè)450nm吸光度-
四、注意事項(xiàng)
試劑保存:未開(kāi)封試劑2-8℃避光保存(有效期6個(gè)月),開(kāi)封后R1/R2需28天內(nèi)用完。
操作規(guī)范:
移液器吸頭不可混用,避免交叉污染。
洗滌需凈,避免殘留氣泡。
安全防護(hù):處理樣本時(shí)需戴手套,廢棄物按生物危害物處理。
五、結(jié)果計(jì)算
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)(濃度-OD值),擬合線(xiàn)性方程。
樣本ALT活性(U/L)=(樣本OD值-空白OD值)/標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)斜率。
六、常見(jiàn)問(wèn)題
高背景值:可能因洗滌不凈或底物曝光時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。
線(xiàn)性不佳:檢查標(biāo)準(zhǔn)品稀釋梯度或孵育溫度一致性。
注意:以上僅供參考,不作為實(shí)際數(shù)據(jù),實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢(xún)技術(shù)老師。
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