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豬肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子(HB-EGF)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說明書
BS-8208 豬肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子(HB-EGF)ELISA試劑盒
以下是天津本生豬肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子(HB-EGF)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說明綜合整理:
一、實(shí)驗(yàn)原理
采用雙抗體夾心法(或一步夾心法)檢測(cè)樣本中的HB-EGF濃度。通過包被抗體捕獲目標(biāo)蛋白,再結(jié)合酶標(biāo)抗體形成復(fù)合物,經(jīng)TMB顯色后測(cè)定OD值,濃度與吸光度呈正相關(guān)。
二、試劑盒組成
主要成分?
預(yù)包被微孔板
標(biāo)準(zhǔn)品(通常含凍干粉,需用稀釋液重構(gòu))
酶標(biāo)抗體、顯色劑(A/B液)、終止液
濃縮洗滌液(需稀釋使用)
保存條件?
未開封試劑需2-8℃保存,標(biāo)準(zhǔn)品及樣本稀釋后建議分裝凍存(-20℃以下),避免反復(fù)凍融。
三、樣本處理
血清/血漿?:離心去除雜質(zhì)(1000×g,15-20分鐘),溶血樣本不可用。
組織勻漿?:需用PBS沖洗后勻漿,離心取上清(5000×g,5-10分鐘)。
細(xì)胞培養(yǎng)上清?:直接離心(1000×g,20分鐘)后檢測(cè)。
四、操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?:按說明書梯度稀釋(通常為2倍系列稀釋)。
加樣與溫育?:
每孔加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本100μL,37℃孵育1-2小時(shí)。
洗滌?:使用稀釋后的洗滌液洗板4-6次。
顯色與終止?:
加入TMB顯色液,避光反應(yīng)10-15分鐘,后加終止液。
檢測(cè)?:450nm波長(zhǎng)讀取OD值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度。
五、注意事項(xiàng)
避免試劑交叉污染,不同批號(hào)組件勿混用。
顯色時(shí)間需嚴(yán)格控制,強(qiáng)陽性樣本可能需進(jìn)一步稀釋。
實(shí)驗(yàn)前需平衡所有試劑至室溫(約30分鐘)。
如需具體參數(shù)(如標(biāo)準(zhǔn)品初始濃度、靈敏度等),請(qǐng)參考試劑盒配套說明書或咨詢技術(shù)老師。
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