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　　如何正確使用凍存管進行細胞凍存?

　　以下是細胞凍存管使用的關(guān)鍵步驟與注意事項，結(jié)合實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作流程：

　　1. ?凍存前準(zhǔn)備?

　　細胞狀態(tài)?：選擇對數(shù)生長期(融合度80%-90%)的細胞，復(fù)蘇后兩周內(nèi)凍存效果佳。

　　凍存液配制?：

　　含血清凍存液?：培養(yǎng)基與血清比例通常為1:1(難培養(yǎng)細胞可提高血清比例)，需搭配程序降溫盒使用?。

　　無血清凍存液?：可直接使用商品化凍存液(如逸漠生物、普美品牌)，無需梯度降溫?。

　　凍存管選擇?：2mL凍存管建議裝1mL細胞懸液，避免體積過大導(dǎo)致冷卻不均?。

　　2. ?細胞處理與分裝?

　　消化與離心?：胰酶消化后，800-1200rpm離心5分鐘，棄上清保留細胞沉淀?。

　　重懸分裝?：加入預(yù)冷凍存液輕柔吹打，分裝至凍存管并標(biāo)記細胞名稱、日期?。

　　3. ?降溫與保存?

　　梯度降溫?(含血清凍存液適用)：

　　4℃ 30分鐘 → -20℃ 2小時 → -80℃過夜 → 液氮長期保存?。

　　直接凍存?(無血清凍存液適用)：分裝后直接放入-80℃冰箱，24小時后轉(zhuǎn)移至液氮?。

　　4. ?關(guān)鍵注意事項?

　　防爆管?：液氮保存時優(yōu)先選擇內(nèi)旋蓋凍存管，避免液氮滲入導(dǎo)致爆管。

　　復(fù)蘇驗證?：凍存后需復(fù)蘇驗證細胞活性，-80℃保存不超過半年。

　　擴展資源?：

　　含血清凍存液需定期更換異丙醇(程序降溫盒內(nèi))?。

　　懸浮細胞凍存需調(diào)整離心參數(shù)(如1000rpm)。

　　注：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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