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BUNSEN資訊| 牛血清的介紹和概述
牛血清是動(dòng)物血清中的一種,是細(xì)胞培養(yǎng)中重要的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份,也是一種常用的生物化學(xué)試劑,有著廣泛的應(yīng)用。由于牛本身是大型動(dòng)物,在研究上具有操作便捷性,收獲效率高等優(yōu)點(diǎn),故牛血清行業(yè)應(yīng)用非常普遍。
牛血清常分為胎牛血清,新生牛血清,小牛血清,成牛血清。
牛血清通常含有一定比例的蛋白質(zhì)、糖類、礦物質(zhì)和維生素;而成牛血清常被用作酸堿調(diào)節(jié)劑、細(xì)胞穩(wěn)定性外源調(diào)節(jié)劑和促進(jìn)修復(fù)和重組等。
【胎牛血清】(Foetal Bovine Serum,簡稱FBS):是采自5-8個(gè)月胎齡牛胚胎中的胎血。此時(shí)胎牛各臟器正處生長分化階段,血中含有豐富的生長發(fā)育因子,非常適合各種細(xì)胞的培養(yǎng),一旦胚胎發(fā)育這些因子自動(dòng)消失。因此8個(gè)月胎齡以上的牛胚胎,已接近足月,不能作為胎牛血清的原料來使用。
【新生牛血清】(Newborn Calf Serum,簡稱NBCS):0—7天內(nèi)(也有說法是0—30天內(nèi));
【小牛血清】(Calf Serum):采自出生30天至1年的小牛。
【成牛血清】(Adult Bovine Serum,簡稱ABS):采自成年牛收全血后分離得到血清。
怎樣篩選合適的胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中一個(gè)非常關(guān)鍵的步驟,首先,將產(chǎn)品測定其pH值,非常重要,要保持在7.4至7.6的pH范圍內(nèi);接下來,要檢查有效成分, 檢查其中的細(xì)胞因子、培養(yǎng)基添加劑和免疫抑制因子的質(zhì)量水平;最后,細(xì)胞存活率的測定也很重要,由于內(nèi)毒素直接參與細(xì)胞凋亡,對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果影響較大,且不同批次的血清,內(nèi)毒素差異又不易控制,牛血清的質(zhì)量越高,細(xì)胞的生存率和能力也越高,可以替代部分試劑中添加的有機(jī)物。
內(nèi)毒素含量越低,級(jí)別越高,以胎牛血清為例:
血清中內(nèi)毒素含量≤10EU/ml時(shí),此血清為特級(jí)胎牛血清;
血清中內(nèi)毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml時(shí),此血清為優(yōu)級(jí)胎牛血清;
血清中內(nèi)毒素含量≥ 25EU/ml時(shí),此血清為標(biāo)準(zhǔn)級(jí)胎牛血清;
胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用:
1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。
2.提供結(jié)合蛋白,能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。
4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。
5.起酸堿度緩沖液作用。
6.提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。
7.參與細(xì)胞凍存。
在細(xì)胞培養(yǎng)中,胎牛血清加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基的濃度大多為5%~20%(最常見為10%)的。具體到不同試驗(yàn),應(yīng)依據(jù)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo),或細(xì)胞類型或基礎(chǔ)培養(yǎng)基的成分來確定相應(yīng)濃度。胎牛血清應(yīng)在-20℃儲(chǔ)存,運(yùn)輸應(yīng)干冰冷鏈運(yùn)輸,避免反復(fù)凍融,確保血清中因子活性不受影響,保證血清優(yōu)良品質(zhì)
儲(chǔ)存條件:-20°C凍存。
胎牛血清解凍后,應(yīng)按單次習(xí)慣用量分裝,分裝后的血清仍-20°C凍存。
若置于4°C的血清,應(yīng)在一周內(nèi)用完,用量頻率少推薦使用EvaCell免分裝50ml的規(guī)格哦
血清和培養(yǎng)基的配制,應(yīng)遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配"原則,保證更好的細(xì)胞培養(yǎng)效果。配好的培養(yǎng)液,應(yīng)于一周內(nèi)用完。
血清避免反復(fù)凍融,避免在4°C或更高溫度儲(chǔ)存過久,否則會(huì)破壞血清中有效活性成分和被污染,影響血清品質(zhì)。
血清融化注意:
在水浴過程中,血清的平面要浸在水中。在融化過程中要慢慢搖動(dòng)瓶身,使血清混勻,但搖動(dòng)中盡量不要產(chǎn)生泡沫!
胎牛血清使用說明:血清從-20℃取出后,融化,按推薦體積加入到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,混勻,制備成新鮮培養(yǎng)基(整個(gè)操作需在無菌超凈臺(tái)中進(jìn)行,注意無菌操作)。配制好的培養(yǎng)基推薦在4℃保存,應(yīng)在1周內(nèi)用完。
關(guān)于熱滅活:胎牛血清不推薦熱滅活。
熱滅活一般是指在做免疫相關(guān)的試驗(yàn)中,通過加熱滅活掉血清中的補(bǔ)體,以避免對(duì)免疫試驗(yàn)的影響。
在胎牛血清中,由于胎齡原因,尚未形成完整的補(bǔ)體系統(tǒng),因此,胎牛血清不會(huì)真正干預(yù)免疫試驗(yàn)。故不需滅活。
并且,熱滅活反而可能導(dǎo)致胎牛血清中部分重要的生長因子的活性衰減,進(jìn)而影響細(xì)胞培養(yǎng)效果。
若針對(duì)某些特殊試驗(yàn),對(duì)于胎牛血清一定要做熱滅活,國際上推薦熱滅活的方法:40℃水浴,20min。
BUNSEN本生胎牛血清優(yōu)勢:
1 全球有的血清來源,批次穩(wěn)定
2 提供細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù),專業(yè)老師指導(dǎo),養(yǎng)細(xì)胞更放心。
3 新批次在試用前,提供試用服務(wù),養(yǎng)細(xì)胞更放心
4 千萬個(gè)血清用戶細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn),為各種細(xì)胞培養(yǎng)提供問題梳理分析,解決方案
5 售后無憂,從簽收日開始計(jì)算,有效期1年,血清在妥善保管、未開封未融化、且不影響二次銷售的情況下,均可享受無條件退貨或換貨的售后保障。
牛血清本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠合作,共創(chuàng)美好的未來。
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