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ELISA試劑盒試驗(yàn)中的溫育有哪些需要考慮
在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后?？乖贵w反響的完結(jié)需求有必定的溫度和時(shí)刻，這一保溫進(jìn)程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育，在ELISA中似不恰當(dāng)。
溫育時(shí)刻的考慮：
ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)作。以抗體包被的夾心法為例，參加板孔中的標(biāo)本，其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時(shí)機(jī)，只需最靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐漸平衡的進(jìn)程，因而需經(jīng)擴(kuò)散才干到達(dá)反響的結(jié)尾。在這以后參加的酶符號抗體與固相抗原的結(jié)合也相同如此。這就是為什么ELISA反響總是需求必定時(shí)刻的溫育。
ELISA試劑盒溫育溫度的考究：
溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是試驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的適宜溫度。在樹立ELISA辦法作反響動力學(xué)研討時(shí)，試驗(yàn)標(biāo)明，兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí)，產(chǎn)物的生成可達(dá)。為加速反響，可進(jìn)步反響的溫度，有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜選用更高的溫度?？乖贵w反響4℃更為，在放射免疫測定中多使反響在冰箱中過夜，以構(gòu)成最多的沉積。但因所需時(shí)刻太長，在ELISA中一般不予選用。
溫育保溫的考慮：
保溫的方法除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外，一般均選用水浴，可將ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底應(yīng)貼著水面，使溫度敏捷平衡。為防止蒸騰，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此刻可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA板應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性杰出的資料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，最終將試劑盒板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)則的溫度，特別是在氣溫較低的時(shí)分更應(yīng)如此。無論是水浴仍是濕盒溫育，反響板均不宜疊放，以確保各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反響，操作時(shí)的室溫應(yīng)嚴(yán)厲約束在規(guī)則的范圍內(nèi)，規(guī)范室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時(shí)可根據(jù)說明書的要求操控溫育。室溫溫育時(shí)，ELISA板只需平置于操作臺上即可。
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