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本生課堂:什么是ELISA,ELISA目的及實(shí)驗(yàn)方法有哪些?
更新時(shí)間:2023-07-12瀏覽:869次

  什么是ELISA,ELISA目的及實(shí)驗(yàn)方法有哪些?

  ELISA即酶聯(lián)免疫吸附測定,指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙x等固相載體上,利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。

  ELISA應(yīng)用的范圍很廣,而且正在不斷地?cái)U(kuò)大,原則上ELISA可用于檢測一切抗原、抗體及半抗原,可以直接定量測定體液中的可溶性抗原。

  擴(kuò)展資料 :

  ELISA操作步驟復(fù)雜,影響反應(yīng)因素較多,特別是固相載體的包被難達(dá)到各個(gè)體之間的一致,因此在定量測定中,每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

  測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA,標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬,曲線最高點(diǎn)的吸光度可接近2.0,繪制時(shí)常用半對數(shù)值,以檢測物的濃度為橫坐標(biāo),以吸光度為縱坐標(biāo),將各濃度的值逐點(diǎn)連接,所得曲線一般呈S形,其頭、尾部曲線趨于平坦,中央較呈直線的部分是的檢測區(qū)域。



  ELISA也可應(yīng)用于病毒抗體檢測:流感病毒、腮腺炎病毒、麻診、風(fēng)疹、輪狀病毒、皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、EB病毒、腺病毒、腸道病毒、腦炎病毒、黃熱病毒、狂犬病毒和脊髓灰質(zhì)炎病毒等,其敏感性都超過目前常用的檢測方法。此外,還可用于鑒定病毒型別,例如皰疹病毒。

  ELISA目的是檢測血清中特定的抗原,以達(dá)到定性判斷的目的。

  酶聯(lián)免疫吸附測定enzyme linked immunosorbent assay(簡寫ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙x等固相載體上,利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。

  ELISA分類方法:

  1、夾心法

  夾心法常用于檢測大分子抗原。

  2、間接法

  間接法常用于檢測抗體。

  3、競爭法

  競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機(jī)制,一般用于檢測小分子抗原。


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  ELISA實(shí)驗(yàn)所有方法的缺點(diǎn)很明顯:

  1、重復(fù)性不好;

  2、收自身抗體、嗜異性抗體等干擾,易出現(xiàn)假陽性;

  3、不論儀器和手工操作,干擾因素較多。影響最大的是溫度和時(shí)間。

  1、直接法(directELISA)

  將抗原直接固定在固相載體上,參加酶符號的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特異性非常重要。

  優(yōu)勢:操作手續(xù)簡略,因無須運(yùn)用二抗可防止交互反響。

  缺陷:實(shí)驗(yàn)中的一抗都得用酶符號,但不是每種抗體都適合做符號,費(fèi)用相對進(jìn)步。

  2.間接法(indirectELISA)

  此測定辦法與直接法相似,不一樣在于一級抗體沒有酶符號,改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。

  優(yōu)勢:二抗能夠加強(qiáng)信號,并且有多種挑選能做不一樣的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保存它最多的免疫反響性。

  缺陷:交互反響發(fā)作的機(jī)率較高。

  3.雙抗體夾心法(sandwichELISA)

  被檢測的抗原包被在兩個(gè)抗體之間,其間一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上,即捕捉抗體。另一個(gè)則是檢測抗體,此抗體可用酶符號后直接測定抗原的量;或不符號,再透過酶符號的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體有必要當(dāng)心選擇,才可防止交互反響或競爭一樣的抗原聯(lián)系部位。

  優(yōu)勢:高活絡(luò)、高專一性,抗原無須事前純化。

  缺陷:抗原必定得具有兩個(gè)以上的抗體聯(lián)系部位。

  4.競爭法(competitiveELISA)

  樣本里的抗原(自在抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一同競爭一樣的抗體,當(dāng)樣品里的自在抗原越多,就能夠聯(lián)系越多的抗體,而固定抗原就只能聯(lián)系到較少的抗體,反之亦然。經(jīng)清潔過程,洗去自在抗原和抗體的復(fù)合物,只留下固定抗原和抗體的復(fù)合物,拿來與只要固定抗原的對照組成果相比擬,依據(jù)呈色區(qū)別就可計(jì)算出樣品里的抗原含量。

  優(yōu)勢:可適用比擬不純的樣本,并且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。

  缺陷:全體的敏感性和專一性都較差。

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